Plateau technique
Présentation
Le pôle Cellules souches humaines pluripotentes induites et organoïdes neuraux permet le partage d’expertise autour des projets impliquant l’utilisation de cellules souches reprogrammées humaines (hiPSCs) et de leurs dérivés, notamment les cellules souches neurales, les neurones et les organoïdes neuraux. Il fournit un soutien pour l’obtention, le maintien, la conservation et la manipulation des hiPSC. Nous proposons des équipements adaptés et des protocoles validés. Notre savoir-faire technologique et notre retour d’expérience vous aideront à concevoir votre projet en échangeant sur les stratégies existantes, la faisabilité locale et technique, et les outils disponibles. Nous proposons un ensemble de formations pratiques, un encadrement technique et scientifique pour les étudiants et le personnel permanent. Dans le cadre d’une collaboration, il est possible de transférer une partie d’un projet ainsi que de demander le développement de nouveaux modèles et applications.
Équipements
– Laboratoire L2 de 25m² (pièce 1104)
– 1 Poste de sécurité microbiologique de type II
– 2 incubateurs à CO²
– Agitateur orbital dans l’incubateur
– Agitateur rotatif en flasque dans l’incubateur
– Microscope à contraste de phase avec caméra
– 1 centrifugeuse réfrigérée
Projet 1
Nous avons développé de l’expertise dans la manipulation, la maintenance, le contrôle qualité, l’amplification, la mise en banque et l’édition (CRISPR) des hiPSCs. Nous avons également de l’expérience dans la dérivation en 2D vers des lignées neurales (progéniteurs, neurones, astrocytes). En 3D, nous avons de l’expertise pour la génération d’organoïdes neuraux (organoïdes cérébraux et organoïdes vésiculaires optiques).
Nous avons un accès facilité aux autres plateformes du CBI et à des plateformes externes pour analyser tous ces types d’échantillons (imagerie, western blot, PCR quantitative, électrophysiologie, etc.)
Projet 2
Nous avons développé une expertise autour des modèles d’organoïdes neuraux dont des organoïdes cérébraux non guidés et des organoïdes de vésicules optiques. Ces organoïdes sont générés à partir d’hiPSCs provenant de patients porteurs ou non de variants pathologiques. Ils sont utilisés dans le cadre d’études en recherche fondamentale en biologie du développement ou recherche pré-clinique.
Organoides cérébraux à 60 jours de croissance
Organoides cérébraux à 20 jours de croissance – montage in toto – imagerie confocale – SOX2 > TUBB3
Organoides cérébraux à 60 jours de croissance – cryosection – imagerie confocale – DAPI > PAX6 > TBR2 > CTIP2
Projet 3
Nous avons développé une expertise dans la maintenance, la conservation, la caractérisation et l’édition du génome des cellules souches pluripotentes humaines induites. Nous avons également développé des partenariats pour la reprogrammation de cellules souches pluripotentes et leur contrôle qualité.
hiPSCs – DAPI > Phalloidin > eGFP
Neurones en culture 2D – MAP2 > DAPI
– Dihydrofolate reductase activity controls neurogenic transitions in the developing neocortex. Saha S, Jungas TT, Ohayon D, Audouard C, Ye T, Fawal MA, Davy A. Development. 2023 Oct 15;150(20):dev201696. doi: 10.1242/dev.201696.
– Inhibition of DHFR targets the self-renewing potential of brain tumor initiating cells. Fawal MA, Jungas T, Davy A. Cancer Lett. 2021 Apr 10;503:129-137. doi: 10.1016/j.canlet.2021.01.026.
